一、 解剖新生大鼠的脊髓組織
1. 用溫?zé)岬纳睇}水擦拭P2天的新生鼠；
2. 用70%乙醇沖洗P2新生鼠；
3. 分離脊髓，放入裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中；
4. 剝離脊膜，轉(zhuǎn)移脊髓到裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中。
二、 制備混合膠質(zhì)細(xì)胞群
1. 清洗所有P2新生鼠的脊髓組織；
2. 把脊髓剪成小塊；
3. 加入新鮮的DMEMwan全培養(yǎng)基4-5ml，吹打10-15次；
4. 用100um的濾器過濾；
5. 離心2500RCF/5min/4℃。
三、 種植混合膠質(zhì)細(xì)胞群
1. 4個P2新生鼠脊髓組織混合細(xì)胞群種到一個T-75培養(yǎng)瓶中；
2. 第5天全量換液，之后每3天全量換液。
四、 原代小膠質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
1. 2-3周，當(dāng)混合的細(xì)胞群長滿T-75培養(yǎng)瓶底；
2. 在37℃以150rps的速度搖動T-75培養(yǎng)瓶2小時;
3. 用移液管從所有T-75培養(yǎng)瓶中收集培養(yǎng)基，不要破壞培養(yǎng)瓶表面的星形膠質(zhì)細(xì)胞層；
4. 離心2500RCF/5min/4℃；
5. 吸取上清液，將沉淀重懸于1 ml小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中；
6. 計數(shù)；
7. 種植小膠質(zhì)細(xì)胞。
五、 代表性結(jié)果
微信二維碼
